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Applicazioni della Real Time PCR nello screening della malattia di Charcot-Marie-Tooth tipo I A

La malattia di Charcot-Marie-Tooth 1A è causata dalla duplicazione di 1.4 Mb nella regione cromosomica 17p11.2, regione che circonda il gene della Proteina della Mielina periferica (PMP22).
Questa regione è fiancheggiata da sequenze ripetute in tandem, spesso responsabili del crossing over ineguale durante la meiosi; il risultato di ciò sarà la presenza di tre copie del gene PMP22.
Il gene PMP22 codifica per la Proteina della mielina Periferica 22; l'over espressione del gene causa effetti importanti sullo sviluppo e il mantenimento della mielina dei nervi periferici.
Nel nostro studio abbiamo testato in parallelo , per il gene PMP22 e per il gene
RNaseP, 100 pazienti CMT 1A e 70 controlli normali. Abbiamo usato per ciascun campione il metodo comparativo del ciclo soglia (DDCt), sia per il gene PMP22 che per RNaseP; mettendo a confronto questi dati con quelli ottenuti da un calibratore (campione diploide), abbiamo ottenuto il numero di copie geniche di ciascun campione.
I valori ottenuti per i pazienti CMT 1A sono:
• 1.51±0.22 SD per i campioni duplicati;
• 0.96±0.11 SD per i campioni normali.
La tecnica è sensibile e specifica nel 100% dei casi; é rapida e minimizza i tempi di diagnosi. Un altro importante aspetto da mettere in risalto è che non c'è sovrapposizione tra i campioni normali e quelli duplicati e quelli normali.

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- 5 - Abstract ABSTRACT Charcot-Marie-Tooth disease (CMT) is a genetically heterogeneous group of disorders sharing the same clinical phenotype, characterized by distal limb muscle wasting and weakness, usually with skeletal deformities, distal sensory loss and abnormalities of deep tendon reflexes; the degree of severity can vary greatly from patient to patient, even within the same family. This work focuses on the most common form of 'demyelinating' neuropathy, Charcot- Marie-Tooth 1A disease and on a technique used to detect subjects affected by this disease: the Real Time PCR. Charcot-Marie-Tooth 1A disease is caused by a 1.4 Mb duplication in the 17p11.2 chromosomal region encompassing the Peripheral Myelin Protein gene (PMP22). This region is flanked by tandem repeated sequences called CMT1A-REPs, often responsible of the unequal crossing over during meiosis; the result of the unequal crossing-over is the presence of three copies of PMP22. The PMP22 gene encodes for the Peripheral Myelin Protein 22 (PMP22); the protein play an important role in the regulation of the correct function of Schwann cells, because it seems to be a structural protein. The consequence of the over-expression of the gene has profound effects on the development and maintenance of myelin of the peripheral nerves. The routine molecular tests actually used to detect the duplication in CMT1A are: - analysis of a recombinant hot spot of 3.2 Kb by PCR; this method is useful to detect the 63% of cases of duplication;

Laurea liv.II (specialistica)

Facoltà: Scienze Matematiche, Fisiche e Naturali

Autore: Gabriella Livide Contatta »

Composta da 59 pagine.

 

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Disponibile in PDF, la consultazione è esclusivamente in formato digitale.