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La coltura in vitro di apici meristematici: la micropropagazione del carciofo "Spinoso sardo" come tecnica di risanamento e moltiplicazione in vitro di germoplasma infetto dal virus TSWV (Tomato-spotted-wilt-virus)

Analisi molecolare: RT-PCR ''one-step''

Il metodo di indagine molecolare scelto in questa tesi sperimentale è l'RT-PCR (retrotrascrizionale-PCR) "one-step". La retrotrascrizione (RT) deve essere effettuata per il semplice fatto che il virus TSWV in oggetto di indagine è un virus a RNA (vedi paragrafo 1.5) e l'enzima utilizzato a questo scopo è la retrotrascrittasi inversa derivata da Avian Myeloblastosis Virus (AMV-RT). La RT-PCR "one-step", in questo caso, permette cosi di far avvenire la retrotrascrizione e l'amplificazione PCR (35 cicli) entrambi nella stessa provetta e in un unico passaggio, mediante l'utilizzo di specifici primers (Reverse e Forward), come quelli indicati nel protocollo RT-PCR "one-step" che segue. Questi sono stati selezionati in base alla sequenza nucleotidica del gene da amplificare del virus TSWV, secondo Scott Adkins et all. e l'amplificazione del genoma virale avviene ovviamente solo se il campione è infetto. Preliminarmente ai cicli RT-PCR è stato estratto l'RNA virale (ove presente) dai campioni in esame risultati precedentemente sospetti dal punto di vista sintomatologico. Dal punto di vista pratico però viene estratto l'RNA totale, compreso quello della pianta; sarà poi la specificità della RT-PCR con i primers specifici utilizzati, a rilevare la presenza del virus con l'avvenuta amplificazione del genoma virale. Di seguito viene descritto il protocollo di estrazione dell'RNA totale dai campioni di foglie di carciofo "Spinoso sardo".

Informazioni tesi

  Autore: Davide Sanna
  Tipo: Laurea liv.II (specialistica)
  Anno: 2016-17
  Università: Università degli Studi di Sassari
  Facoltà: Scienze Biomediche
  Corso: 8/S
  Relatore: Pier Luigi Fiori
  Lingua: Italiano
  Num. pagine: 72

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Parole chiave

micropropagazione
carciofo
germoplasma
tswv
spinoso sardo

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