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Zebrafish (Danio Rerio) come sistema modello dello studio dei vertebrati

Estratto della Tesi di Michele Cernigliaro

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8 acetato e EDTA).L'EDTA è un chelante per gli ioni bivalenti. Viene aggiunto anche un tampone Tris HCl. L’elettroforesi non separa le molecole solo in base al loro P.M.,ma anche in base alla forma e alle proprietà topologiche. Una molecola di DNA circolare, rilassata o tagliata in una delle due eliche, migra più lentamente di una molecola con la stessa massa. Inoltre come si è visto i DNA superavvolti (supercoiled), che sono compatti e hanno un volume effettivo piccolo, migrano più velocemente durante l’elettroforesi di quanto facciano DNA meno superavvolti o circolari rilassati di uguale massa. Attraverso l’elettroforesi potremo vedere se, con la presenza di una singola banda,la PCR ha funzionato ed ha trascritto un singolo frammento di DNA bersaglio. Tramite poi ibridazione in situ è possibile osservare quando un gene viene espresso in una determinata fase dello sviluppo. IBRIDAZIONE IN SITU Le molecole di DNA, precedentemente separate in base alle dimensioni su gel di policrilammide in base alle dimensioni vengono analizzate tramite ibridazione in situ. Nell’ibridazione in situ una molecola di DNA viene separata ed una molecola sonda,marcata con nucleotidi radioattivi, si lega al DNA denaturato. La sonda marcata viene utilizzata per cercare sequenze complementari in miscele di acidi nucleici. Esistono fondamentalmente due metodi per marcare il DNA: il primo prevede la sintesi di nuovo DNA in presenza di un precursore marcato. La marcatura per incorporazione è eseguita mediante la PCR , in cui si inserisce un precursore marcato, oppure ibridando al DNA brevi nucleotidi esamerici a sequenza causale e consentendo alla DNA Pol di estenderli. I precursori marcati più comunemente usati sono nucleotidi modificati, dotati di una parte fluorescente o di atomi radioattivi. Di solito la porzione fluorescente deve essere attaccata alla base di uno dei quattro nucleotidi, usati come precursori per la sintesi di DNA.
Estratto dalla tesi: Zebrafish (Danio Rerio) come sistema modello dello studio dei vertebrati

Estratto dalla tesi:

Zebrafish (Danio Rerio) come sistema modello dello studio dei vertebrati

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Informazioni tesi

  Autore: Michele Cernigliaro
  Tipo: Laurea liv.I
  Anno: 2013-14
  Università: Università degli Studi di Milano
  Facoltà: Scienze Biotecnologiche
  Corso: Scienze biologiche
  Relatore: Franco Cotelli
  Lingua: Italiano
  Num. pagine: 21

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