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Clonaggio del cDNA per il fattore di differenziamento eritrocitario EDRF e studio della sua espressione nell’uomo

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<br/><b>1 INTRODUZIONE </b> <br/> <br/><b>1.1 I PRIONI</b> <br/> 1.1.1 Concetto di prione e ipotesi prionica <br/> 1.1.2 Il prione: una proteina, due isoforme <br/> 1.1.3 Caratteristiche strutturali e funzionali di un prione <br/> <br/><b>1.2 LE MALATTIE PRIONICHE </b> <br/> 1.2.2 Le malattie prioniche negli animali <br/> 1.2.1 Le malattie prioniche nell'uomo <br/> 1.2.3 La barriera di specie e il ruolo della proteina X <br/> <br/><b>1.3 RUOLO DELL'EDRF NELLA DIAGNOSTICA DELLE TSE </b> <br/> 1.3.1 EDRF: un marker periferico per la diagnosi precoce delle TSE<br/> <br/><b>1.4 CARATTERIZZAZIONE DELL'EDRF UMANO </b> <br/> 1.4.1 Funzione dell'EDRF <br/> 1.4.2 Caratterizzazione biofisica dell'EDRF <br/> <br/><b>1.5 SCOPO DELLA TESI</b> <br/> <br/><b>2 MATERIALI E METODI </b> <br/> <br/><b>2.1 PRELIEVO E CONSERVAZIONE DEL SANGUE </b> <br/> <br/><b>2.2 PURIFICAZIONE DELL'RNA TOTALE DA SANGUE INTERO </b> <br/> 2.2.1 Analisi spettrofotometrica dell'RNA estratto<br/> 2.2.2 Verifica dell'integrit&agrave; dell'RNA estratto <br/> 2.2.3 Retrotrascrizione e PCR dell'RNA totale come verifica della presenza dell'RNA eritrocitario<br/> <br/><b>2.3 NORTHERN BLOT </b> <br/> 2.3.1 Elettroforesi su gel di agarosio in condizioni denaturanti<br/> 2.3.2 Trasferimento<br/> <br/><b>2.4 PRODUZIONE DELLA SONDA UTILIZZATA PER GLI ESPERIMENTI DI IBRIDAZIONE </b> <br/> 2.4.1 Isolamento dell'RNA<br/> 2.4.2 Retrotrascrizione e PCR<br/> 2.4.3 Corsa elettroforetica ed estrazione del DNA da gel di agarosio <br/> 2.4.4 Clonaggio: ligazione e trasformazione <br/> 2.4.5 Estrazione e caratterizzazione del plasmide ricombinante <br/> <br/><b>2.5 ESPERIMENTI DI IBRIDAZIONE </b> <br/> 2.5.1 Marcatura e purificazione della sonda<br/> 2.5.2 Ibridazione della sonda<br/> 2.5.3 Autoradiografia<br/> 2.5.4 Disibridazione<br/> 2.5.5 Ibridazione con la sonda per l'rRNA 18S <br/> <br/><b>2.6 ANALISI DENSITOMETRICA</b> <br/> <br/><b>3 RISULTATI E DISCUSSIONE</b> <br/> <br/><b>3.1 ESTRAZIONE DELL'RNA TOTALE DA SANGUE UMANO PERIFERICO</b> <br/> 3.1.1 Analisi spettrofotometrica dell'RNA estratto<br/> 3.1.2 Verifica dell'integrit&agrave; dell'RNA estratto <br/> 3.1.3 Retrotrascrizione e PCR dell'RNA totale come verifica della presenza dell'RNA eritrocitario<br/> <br/><b>3.2 CLONAGGIO</b> <br/> 3.2.1 Amplificazione in PCR <br/> 3.2.2 Digestione con endonucleasi di restrizione <br/> 3.2.3 Analisi della sequenza nucleotidica <br/> <br/><b>3.3 NORTHERN BLOT </b> <br/> <br/><b>3.4 ESPERIMENTI DI IBRIDAZIONE </b> <br/> <br/><b>3.5 ANALISI DENSITOMETRICA ED ELABORAZIONE STATISTICA DEI DATI OTTENUTI </b> <br/> 3.5.1 Intervallo di confidenza <br/> <br/><b>4 CONCLUSIONI</b> <br/> <br/><b>5 ABBREVIAZIONI</b> <br/> <br/><b>6 BIBLIOGRAFIA</b> <br/>
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Clonaggio del cDNA per il fattore di differenziamento eritrocitario EDRF e studio della sua espressione nell’uomo

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Informazioni tesi

  Autore: Davide Sartini
  Tipo: Tesi di Laurea
  Anno: 2002-03
  Università: Università Politecnica delle Marche
  Facoltà: Scienze Matematiche, Fisiche e Naturali
  Corso: Scienze Biologiche
  Relatore: Monica Emanuelli
  Lingua: Italiano
  Num. pagine: 142

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