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Studio dell’Interattoma della Proteina PAR-6 in Cellule di Carcinoma Mammario della linea 8701-BC

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Sommario Indice delle figure ............................................................................................................................................... 6 Introduzione ........................................................................................................................................................ 7 Complessi giunzionali .................................................................................................................................... 7 Giunzioni aderenti ...................................................................................................................................... 8 Desmosomi ............................................................................................................................................... 11 Emidesmosomi .......................................................................................................................................... 12 Giunzioni occludenti ................................................................................................................................. 13 Polarità .......................................................................................................................................................... 18 Complessi della polarità ........................................................................................................................... 19 Sistema PAR-aPKC .................................................................................................................................. 21 I complessi Scribble, Crumbs e Yrt/Coracle............................................................................................. 22 Complesso PAR ........................................................................................................................................ 24 Obiettivi ............................................................................................................................................................ 28 Materiali e metodi ............................................................................................................................................. 30 Colture cellulari ............................................................................................................................................ 30 Scongelamento cellule crio-conservate .................................................................................................... 30 Cambio del mezzo di coltura .................................................................................................................... 30 Sub-coltivazione della linea cellulare ...................................................................................................... 31 Conta cellulare ......................................................................................................................................... 32 Crio-conservazione delle cellule .............................................................................................................. 33 Estrazione delle proteine tramite lisi cellulare.............................................................................................. 33 Co-immunoprecipitazione ............................................................................................................................ 34 Preparazione del campione ...................................................................................................................... 35 Incubazione del campione e precipitazione dell’imunocomplesso ........................................................... 35 Lavaggio delle componenti aspecifiche .................................................................................................... 37 Eluizione del complesso legato all’anticorpo........................................................................................... 38 Saggio di Bradford ....................................................................................................................................... 39 SDS-PAGE ................................................................................................................................................... 39 Elettroforesi bidimensionale (2D-IPG) ........................................................................................................ 40 IPG ........................................................................................................................................................... 41 Separazione delle proteine per peso molecolare: 2° dimensione ............................................................ 42 Colorazione con Nitrato d’argento ............................................................................................................... 43 Analisi computerizzata dei gels .................................................................................................................... 44 Western blot.................................................................................................................................................. 45 Trasferimento su membrana ..................................................................................................................... 45 Identificazione degli spots tramite MALDI-TOF ......................................................................................... 46 Decolorazione degli spots ........................................................................................................................ 46 Digestione con la tripsina......................................................................................................................... 47 Estrazione dei peptidi ............................................................................................................................... 47 Purificazione dei peptidi triptici tramite puntali ZIP-TIP ........................................................................ 48 Acquisizione degli spettri di massa MALDI-TOF .................................................................................... 49 Risultati e discussione ...................................................................................................................................... 50 Espressione della proetina Par-6 in cellule epiteliali normali HB2 e cellule di carcinoma mammario 8701- BC ................................................................................................................................................................. 50 Co-immunoprecipitazione con anticorpo anti Par-6 del lisato totale di 8701-BC ........................................ 51 Identificazione delle proteine tramite spettrometria di massa MALDI-TOF ............................................... 52 Associazione delle proteine identificate con Par6 ........................................................................................ 53 Acyl-CoA-binding protein (ACBP) ........................................................................................................... 54 Coronina 1B (COR1B) ............................................................................................................................. 56 Acid leucin-rich phosphoprotein 32 family member A (AN32A) .............................................................. 57 Glutathion S-Transferase (GST) ............................................................................................................... 59 Ras-related protein (RAB) e Ras-related and estrogen-regulated growth inhibitor (RERG) .................. 61 S100A14 .................................................................................................................................................... 64 Tropomiosina 3 (TPM3) ........................................................................................................................... 66 Calcium and integrin-binding family member 3 (CIB3) ........................................................................... 68 EH domain-containing protein 1 (EHD1) ................................................................................................ 69 Glycerophosphodiester phosphodiesterase domain-containing protein 3 (GDPD 3) .............................. 70 Conclusioni ....................................................................................................................................................... 71 Bibliografia ....................................................................................................................................................... 72
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Informazioni tesi

  Autore: Antonio Boscarino
  Tipo: Laurea liv.II (specialistica)
  Anno: 2011-12
  Università: Università degli Studi di Palermo
  Facoltà: Scienze Matematiche, Fisiche e Naturali
  Corso: Biotecnologie per l'Industria e la Ricerca Scientifica
  Relatore: Patrizia Cancemi
  Lingua: Italiano
  Num. pagine: 77

FAQ

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Parole chiave

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antonio boscarino
breast cancer
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giunzioni cellulari
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