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Analisi peptidomica dei biofluidi

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Anteprima della tesi: Analisi peptidomica dei biofluidi, Pagina 3
Analisi peptidomica dei biofluidi 
 
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Un pool di sieri di pazienti sani è stato trattato con tre differenti metodiche: 
arricchimento per affinità per mezzo di biglie derivatizzate (Proteominer Beads), 
solubilizzazione differenziale in miscele di solventi (DS) ed ultrafiltrazione. 
Per la valutazione del pattern proteico generato dai tre differenti approcci, sono stati 
condotti esperimenti di elettroforesi monodimensionale utilizzando gel in tricina per 
poter visualizzare la porzione proteica a basso peso molecolare.   
L’elettroforesi monodimensionale ha consentito di avere una prima visualizzazione del 
frazionamento esercitato dalle tre metodiche e di separare le proteine prima di 
sottoporle all’analisi mediante spettrometria di massa (MS).  
Le bande selezionate per l’analisi in spettrometria di massa sono state opportunamente 
processate mediante una serie di passaggi sperimentali, tra i quali l’idrolisi enzimatica 
con tripsina. Le miscele peptidiche risultanti sono state sottoposte all’analisi MS, che 
consiste nella ionizzazione degli analiti, nella misura del loro peso molecolare e nella 
loro frammentazione, che conduce ad informazioni di sequenza. I dati ottenuti sono stati 
inseriti in un software, che, interrogando le banche dati proteiche, ha consentito 
l’identificazione delle proteine analizzate e del numero di peptidi totali. 
Il confronto dei risultati ottenuti dall’analisi dei campioni trattati con le tre metodiche, si 
è basato sulla resa in termini di numero di proteine uniche e peptidi totali. 
Da tale confronto, il metodo DS è risultato quello più adatto allo scopo di questo lavoro, 
sia in termini di numero di peptidi identificati, sia per la sua facile applicabilità. 
Nella seconda parte del lavoro, il metodo prescelto è stato applicato a sieri di pazienti 
affetti da patologie neurodegenerative che sono stati trattati ed analizzati allo stesso 
modo dei sieri di controllo.

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Analisi peptidomica dei biofluidi

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Informazioni tesi

  Autore: Antonia Noce
  Tipo: Laurea II ciclo (magistrale o specialistica)
  Anno: 2010-11
  Università: Università degli Studi di Sassari
  Facoltà: Scienze Matematiche, Fisiche e Naturali
  Corso: Biotecnologie industriali
  Relatore: Marilena  Formato
  Lingua: Italiano
  Num. pagine: 68

FAQ

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Parole chiave

ultrafiltrazione
biomarker discovery
peptidomica
siero umano
solubilizzazione differenziale
proteominer beads
proteine uniche
peptidi unici

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