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Proteomica degli exosomi urinari per la ricerca di biomarcatori nella nefropatia diabetica e nelle tubulopatie ereditarie

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II 1. INTRODUZIONE 1.1 NEFROPATIA DIABETICA pg. 2 1.1.1 Caratteri generali ed epidemiologia pg. 2 1.1.2 Storia naturale pg. 3 1.1.3 Patogenesi 1.1.3.1 Modificazioni strutturali renali 1.1.3.2 Cambiamenti emodinamici 1.1.3.3 Ruolo dell’iperglicemia 1.1.3.4 Altri fattori patogenetici 1.1.4 Diagnosi e Prognosi 1.1.5 Terapia 1.1.6 Biomarcatori 1.1.7 Modelli animali pg. 4 pg. 5 pg. 7 pg. 8 pg. 10 pg. 14 pg. 17 pg. 19 pg. 22 1.2 TUBULOPATIE pg. 24 1.2.1 Ipopotassiemie di origine reno-tubulare 1.2.2 Sindrome di Gitelman 1.2.3 Sindrome di Bartter 1.2.4 Patogenesi delle principali anomalie biochimico-cliniche 1.2.5 Diagnosi differenziale 1.2.6 Prognosi 1.2.7 Terapia pg. 24 pg. 26 pg. 29 pg. 37 pg. 40 pg. 42 pg. 42 1.3 EXOSOMI ed EXOSOMI URINARI pg. 43 1.3.1 Isolamento degli exosomi dai fluidi biologici pg. 45 1.3.2 Biogenesi pg. 49 1.3.3 Composizione pg. 52 1.3.4 Funzioni pg. 61 1.3.5 Uso clinico degli exosomi 1.3.6 Biomarcatori di malattie renali negli exosomi pg. 64 pg. 66 2. SCOPO DELLA TESI pg. 71 3. MATERIALI E METODI pg. 73 3.1 Materiali 3.2 Apparecchiature 3.3 Tecniche di frazionamento 3.3.1 Casistica 3.3.2 Raccolta urine pg. 74 pg. 75 pg. 76 pg. 76 pg. 76 III 3.3.3 Isolamento degli exosomi mediante ultracentrifugazione 3.3.4 Estrazione delle proteine urinarie mediante ultrafiltrazione pg. 76 pg. 78 3.4 Elettroforesi monodimensionale 3.5 Elettroforesi bidimensionale diagonale 3.6 Western Blotting 3.7 Immunodecorazione 3.8 Metodi di colorazione dei gel 3.8.1 Colorazione con Simply Blue 3.8.2 Colorazione fluorescente con Sypro Ruby 3.9 Dosaggi proteici 3.9.1 Metodo Bradford Biorad 3.9.2 Dosaggio NanoDrop 3.9.3 Metodo del BCA 3.10 Analisi proteomica mediante spettrometria di massa 3.10.1 Digestione in gel con tripsina 3.10.2 Analisi LC-ESI-MS/MS 3.10.3 Mascot 3.10.4 Digestione gel-free con tripsina 3.12.5 Analisi LC-ESI-MS/MS per quantificazione label-free 3.12.6 Elaborazione dei dati LC-ESI-MS/MS 3.11 Analisi mutazionale in silico tramite software SIFT 3.12 Analisi statistica pg. 78 pg. 80 pg. 83 pg. 84 pg. 85 pg. 85 pg. 85 pg. 86 pg. 86 pg. 87 pg. 87 pg. 88 pg. 89 pg. 90 pg. 92 pg. 94 pg. 96 pg. 97 pg. 99 pg. 99 4. RISULTATI 4.1 Exosomi urinari e Nefropatia Diabetica 4.1.1. Modello animale di diabete di tipo 2 4.1.2. Caratterizzazione degli exosomi urinari 4.1.3. Proteomica degli exosomi urinari 4.1.4. Analisi bioinformatica 4.1.5. Validazione del contenuto differenziale di alcune proteine negli exosomi urinari di ratti diabetici e controlli. 4.2 Exosomi urinari e Tubulopatie Ereditarie 4.2.1. Casistica 4.2.2. Caratterizzazione degli exosomi urinari 4.2.3. Ricerca dei trasportatori delle SLTs negli exosomi urinari 4.2.4. Proteomica degli exosomi urinari 5. CONCLUSIONI 6. BIBLIOGRAFIA 7. RINGRAZIAMENTI pg. 100 pg. 101 pg. 101 pg. 103 pg. 106 pg. 115 pg. 118 pg. 122 pg. 122 pg. 131 pg. 134 pg. 145 pg. 155 pg. 160 pg. 171
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Informazioni tesi

  Autore: Samuele Corbetta
  Tipo: Tesi di Dottorato
Dottorato in Tecnologie Biomediche
Anno: 2015
Docente/Relatore: Marina Pitto
Correlatore: FrancescaRaimondo
Istituito da: Università degli Studi di Milano - Bicocca
Dipartimento: Dipartimento di Scienze della Salute
  Lingua: Italiano
  Num. pagine: 179

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Parole chiave

proteomica
nefropatia
urine
exosomi
tubulopatie

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