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La coltura in vitro di apici meristematici: la micropropagazione del carciofo "Spinoso sardo" come tecnica di risanamento e moltiplicazione in vitro di germoplasma infetto dal virus TSWV (Tomato-spotted-wilt-virus)

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4 INDICE 1 CAPITOLO – INTRODUZIONE ............................................................................ 9 1.1 DEFINIZIONE DELLA COLTURA IN VITRO ..................................................................... 9 1.1.1 Cenni storici della coltura in vitro e stato dell’arte .................................10 1.2 CENNI STORICI, BOTANICA E COLTIVAZIONE DEL CARCIOFO .................................. 12 1.3 LA MICROPROPAGAZIONE ......................................................................................... 14 1.3.1 Generalità ...................................................................................................................14 1.3.2 Micropropagazione del carciofo “Spinoso sardo” e inquadramento della tecnica in ambito agronomico e del comparto cinaricolo regionale ..16 1.3.3 Fasi generali della micropropagazione ........................................................20 1.4 SCOPO, OBIETTIVO E PRESENTAZIONE DELLA TESI SPERIMENTALE ...................... 22 1.5 IL VIRUS TSWV E I SUOI VETTORI ............................................................................ 23 1.5.1 Diagnosi TSWV ........................................................................................................30 2 CAPITOLO - MATERIALI E METODI ............................................................. 31 2.1 INFEZIONE ARTIFICIALE E SCREENING DEL MATERIALE VEGETALE DI PARTENZA PER GLI ESPIANTI E PER LA PROPAGAZIONE TRADIZIONALE PER “OVOLI” ......................... 31 2.1.1 Protocollo infezione artificiale e/o meccanica delle “Piante campione” di carciofo “Spinoso sardo” .......................................................................33 2.2 FASI DELLA MICROPROPAGAZIONE DEL CARCIOFO “SPINOSO SARDO” .................. 34 2.2.1 Fase 0 ...........................................................................................................................34 2.2.2 Fase 1 ...........................................................................................................................37 2.2.3 Fase 2 ...........................................................................................................................41 2.2.4 Fase 3 ...........................................................................................................................43 2.2.5 Fase 4 ...........................................................................................................................45 2.3 DIAGNOSI MOLECOLARI PER INDIVIDUAZIONE DEL VIRUS TSWV ........................ 48 2.3.1 Analisi sierologica-immunologica: test ELISA diretto (DAS-ELISA) ..48 2.3.1.1 Preparazione dei campioni per il DAS-ELISA: protocollo di estrazione..................................................................................................................... 50 2.3.1.2 Protocollo DAS-ELISA ............................................................................ 51 2.3.2 Analisi molecolare: RT-PCR “one-step” .........................................................52 2.3.2.1 Protocollo di estrazione RNA totale. ............................................... 53 2.3.2.2 Protocollo RT- PCR ................................................................................. 55 2.3.2.3 Protocollo elettroforesi gel di agarosio (1%) ............................... 56 2.4 ANALISI STATISTICA ................................................................................................... 57 3 CAPITOLO – RISULTATI E DISCUSSIONE.................................................... 58 3.1 RISULTATI DEI TEST VIROLOGICI PRELIMINARI (DAS-ELISA E RT-PCR) SUL MATERIALE VEGETALE DI CARCIOFO “SPINOSO SARDO” SOTTOPOSTO AD INFEZIONE MECCANICA CON INOCULO DEL VIRUS TSWV ....................................................................... 58 5 3.2 MATERIALE VEGETALE DERIVATO DALLA MICROPROPAGAZIONE: RISULTATI OTTENUTI ................................................................................................................................. 59 3.3 MATERIALE VEGETALE DERIVATO DALLA PROPAGAZIONE TRADIZIONALE PER “OVOLI”: RISULTATI OTTENUTI .............................................................................................. 60 3.4 DIFFERENZE NEL TASSO DI MOLTIPLICAZIONE: RISULTATI OTTENUTI ................ 61 3.5 ANALISI STATISTICA DEI DATI RELATIVI AL RISANAMENTO OTTENUTO CON LE DUE TECNICHE PROPAGATIVE......................................................................................................... 62 4 CONCLUSIONI ...................................................................................................... 63 5 BIBLIOGRAFIA .................................................................................................... 66
Indice della tesi: La coltura in vitro di apici meristematici: la micropropagazione del carciofo "Spinoso sardo" come tecnica di risanamento e moltiplicazione in vitro di germoplasma infetto dal virus TSWV (Tomato-spotted-wilt-virus), Pagina 2

Informazioni tesi

  Autore: Davide Sanna
  Tipo: Laurea liv.II (specialistica)
  Anno: 2016-17
  Università: Università degli Studi di Sassari
  Facoltà: Scienze Biomediche
  Corso: 8/S
  Relatore: Pier Luigi Fiori
  Lingua: Italiano
  Num. pagine: 72

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Parole chiave

micropropagazione
carciofo
germoplasma
tswv
spinoso sardo

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