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Isolamento di una nuova malico deidrogenasi da semi di Ceratonia siliqua L. con possibili impieghi in campo biotecnologico

Informazioni tesi

  Autore: Clelia Muccio
  Tipo: Tesi di Laurea Magistrale
  Anno: 2010-11
  Università: Seconda Università degli Studi di Napoli
  Facoltà: Scienze Matematiche, Fisiche e Naturali
  Corso: Scienze Biologiche
  Relatore: Antimo Di Maro
  Lingua: Italiano
  Num. pagine: 76

Base di partenza del mio lavoro di tesi sperimentale è stato quello di verificare, da un iniziale omogenato di semi (5 g) di Ceratonia siliqua L., la presenza di:
- attività polinucleotide adenosin glicosidasica;
- attività inibente la tripsina;
- capacità di agglutinare i globuli rossi umani;
- attività perossidasica (POD).

Saggi preliminari qualitativi hanno mostrato che vi era una risposta positiva per i vari saggi messi a punto.
In seguito, un maggior quantitativo di omogenato di semi (50 g), è stato sottoposto a metodi di separazione sia tramite classici procedimenti cromatografici (scambio cationico, gel filtrazione), che cromatografia per affinità su Blue-Sepharose.
Entrambi gli approcci hanno previsto un’iniziale precipitazione dell’estratto con Solfato di ammonio (al 40 e 100 %), dato l’elevato contenuto di glucidi complessi.
L’isolamento dell’attività APGasica, rilevatasi all’inizio più elevata, è stata quella seguita con maggior attenzione poiché spesso è associata all’attività delle proteine inattivanti i ribosomi.
La proteina che sembrava legata a questa attività aveva un peso di circa 36 kDa. La determinazione della sequenza N-terminale, però, ha fatto emergere che tale proteina è una Malico deidrogenasi, mediante studi di similitudine.

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Parole chiave

carob seeds
ceratonia siliqua l.
malate dehydrogenase
protein purification
biotecnologia
carrube

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