Tesi Sperimentale: Valore prognostico dell’analisi di espressione di Galectina-3 nei tumori neuroblastici

Inclusione
L’impregnazione in paraffina va effettuata in stufa termostatata, se l’inclusione è manuale, o in speciali contenitori se la stessa è di tipo automatico. È molto importante che la temperatura da usare sia quella di fusione della paraffina, ponendo attenzione soprattutto a mantenerla costante per evitare da un lato il consolidamento della paraffina e dall’altro la cottura del campione. Questo passaggio richiede almeno due immersioni della durata di due ore ciascuna.

I tessuti (biopsie o cellblocks) impregnati di paraffina devono essere inclusi in blocchetti. Per l’allestimento manuale di questi ultimi si possono utilizzare le formelle di Leuckart, biocassette, o formelle di metallo. Riempito parzialmente il contenitore con paraffina fusa, vi si immerge il frammento da includere, disponendolo su un piano parallelo al fondo della formina metallica. Appena la paraffina comincia a solidificare, si colma la formina metallica con altra paraffina fusa, e quindi la si lascia raffreddare a temperatura ambiente o appoggiando il blocchetto su una piastra raffreddante. Avvenuto il consolidamento del blocchetto, lo si estrae dalla formina ed il tessuto (biopsia) così inglobato in un mezzo omogeneo è pronto per essere tagliato. Infatti, l’inclusione in paraffina ha lo scopo di fornire al campione di tessuto un supporto che ne aumenti la consistenza e ne renda possibile il taglio in sezioni sottili.

Taglio
Il taglio degli inclusi si esegue al microtomo, grazie al quale è possibile ottenere sezioni istologiche di pochi microns.
Le sezioni ottenute con il taglio al microtomo vengono raccolte con un pennello e poste a galleggiare su una superficie d’ acqua a temperatura ambiente al fine di far distendere la sezione. Con l’aiuto di un vetrino a carica si sposta la sezione in una superficie d’acqua a 50°C circa per permettere la completa distensione del tessuto e l’adesione al vetrino stesso.

Allestimento di sezioni istologiche convenzionali
Per questo studio sono pervenuti 128 blocchetti di tumori neuroblastici, allestiti in diversi Centri Diagnostici Specializzati. Da questo materiale sono state ottenute 6 sezioni da 2 µm ciascuna. Una sezione è stata utilizzata per la colorazione standard in ematossilina/eosina al fine di verificare le diagnosi poste; le restanti sezioni istologiche sono state invece utilizzate per le indagini immunoistochimiche, secondo le procedure di seguito riportate…