Caratterizzazione strutturale e funzionale di un enzima fibrinogenolitico dal veleno del serpente Trimeresurus elegans

<br><b>1. Introduzione </b><br/>
 1.1 Serpenti velenosi e significato biologico dei loro veleni <br/>
 1.2 La coagulazione del sangue <br/>
 1.4 Trombina e proteasi a serina <br/>
 1.5 Componenti proteici dei veleni di serpente <br/>
 1.6 Tecniche di spettrometria di massa <br/>
 1.7 Scopo del lavoro <br/>
<br><b>2. Materiali </b><br/>
<br><b>3. Metodi	 </b><br/>
 3.1 Purificazione dell'enzima <br/>
 3.2 Determinazione della concentrazione proteica <br/>
 3.3 Elettroforesi su gel di poliacrilammide (SDS-PAGE) <br/>
 3.4 Caratterizzazione funzionale <br/>
 3.4.1 Saggio di attivit&agrave; proteasica di tipo trombinico <br/>
 3.4.2 Saggio di attivit&agrave; proteasica di tipo chimotripsinico <br/>
 3.4.3 Saggio di attivit&agrave; proteasica di tipo tripsinico <br/>
 3.4.4 Saggio di aggregazione piastrinica <br/>
 3.4.5 Saggio da inibizione da irudina <br/>
 3.4.6 Rilascio di fibrinopeptidi <br/>
 3.4.7 Saggio di coagulazione del fibrinogeno <br/>
 3.4.8 Idrolisi del fibrinogeno (attivit&agrave; fibrinogenolitica) <br/>
 3.4.9 Determinazione del pH ottimale di funzionamento <br/>
 3.4.10 Determinazione del punto isoelettrico <br/>
 3.5 Caratterizzazione strutturale	 <br/>
 3.5.1 Determinazione del peso molecolare mediante ES <br/>
 3.5.2 Determinazione della sequenza N-terminale <br/>
3.5.3	Riduzione dei ponti disolfuro e alchilazione dei residui di cisteina <br/>
3.5.4 Idrolisi enzimatica <br/>
3.5.5 Desalificazione mediante Sep-pak <br/>
3.5.6 Analisi della miscela peptidica mediante MALDI <br/>
3.5.7 Separazione cromatografica dei peptidi <br/>
3.5.8 Ricerca delle omologie in Banca Dati <br/>
<br><b>4. Risultati </b><br/>
4.1 Purificazione dell'enzima <br/>
4.2 Determinazione del peso molecolare mediante SDS-PAGE pag.43<br/>
4.3 Attivit&agrave; proteasica di tipo trombinico <br/>
4.4 Attivit&agrave; proteasica di tipo chimotripsinico <br/>
4.5 Attivit&agrave; proteasica di tipo tripsinico <br/>
4.6 Attivit&agrave; proaggregante piastrinica <br/>
4.7 Inibizione da irudina <br/>
4.8 Attivit&agrave; fibrinogenolitica e fibrinolitica <br/>
4.9 Rilascio di fibrinopeptidi <br/>
4.10 Determinazione del pH ottimale di funzionamento <br/>
4.11 Determinazione del punto isoelettrico <br/>
4.12 Determinazione del peso molecolare mediante ES/MS <br/>
4.13 Sequenza N-terminale e confronto con proteine note <br/>
4.14 Ricerca delle omologie in Banca Dati <br/>
<br><b>5. Discussione </b><br/>
<br><b>6. Ringraziamenti	 </b><br/>
<br><b>7. Bibliografia 	 </b><br/>