Ricerca di MAP nella fauna selvatica (Cervus elaphus). Isolamento e genotipizzazione da campioni di campo

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misure di ordine igienico sanitario messe in atto a protezione dei vitelli (Arrigoni, 
2003). 
1.12.4.5 Immunocitochimica 
L’immunocitochimica è una tecnica che riveste un ruolo molto importante nella 
routine del laboratorio di anatomia patologica; è in grado, infatti, di individuare 
specifiche molecole o strutture del compartimento intracellulare ed 
extracellulare. La tecnica immunocitochimica si basa sul principio di reazione 
antigene-anticorpo, in addizione poi con sistemi di rivelazione (enzimatici, 
fluorescenti) che ne rendono visibile l’avvenuta reazione al microscopio. 
Esistono metodiche dirette o indirette; nelle metodiche dirette si utilizza un 
unico anticorpo diretto contro la molecola da ricercare e questo stesso 
anticorpo lega una sostanza colorata che ne permette la visualizzazione. Nelle 
metodiche indirette si utilizzano due anticorpi: il primo diretto contro la molecola 
da ricercare, il secondo, coniugato con la sostanza colorata, che andrà a legarsi 
al primo anticorpo. 
La molecola da ricercare nella sezione di tessuto in esame viene riconosciuta 
da un anticorpo prodotto da un animale immunizzato contro quella molecola. 
Nelle metodiche indirette è necessario che il secondo anticorpo provenga da 
specie differenti da quella da cui è stato prodotto il primario perché altrimenti 
non sarebbe riconosciuto come antigene. In queste metodiche l'anticorpo 
primario diventa l'antigene che deve essere riconosciuto dall'anticorpo 
secondario.  
L’immunocitochimica è risultato molto efficace nell'identificare M. 
paratuberculosis in tessuti di cervi interessati. Questo metodo potrebbe essere 
particolarmente utile quando non vi è materiale disponibile per l'isolamento di 
batteri. Inoltre i risultati sono molto rapidi, in contrasto con il lungo periodo 
richiesto generalmente dai micobatteri per crescere. L’immunocitochimica 
fornisce una migliore accuratezza nella diagnosi in quanto utilizza gli anticorpi 
diretti contro gli antigeni solubili e insolubili di M. paratuberculosis (Hove et al., 
1998).