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Survivin protegge il rene trapiantato dai danni da ischemia/riperfusione (I/R)

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INDICE Pag 1 INDICE INDICE Pag 1 1. RIASSUNTO e ABSTRACT Pag 4 1.1. Riassunto >> 4 1.2. Abstract >> 6 2. INTRODUZIONE Pag 8 2.1. Il trapianto >> 8 2.1.1. Definizioni >> 8 2.1.2. Il rigetto >> 9 2.1.2.1. Riconoscimento diretto e indiretto >> 10 2.1.2.2. Tipi di rigetto >> 11 2.1.3. Il trapianto di rene >> 13 2.1.3.1. Un po’ di storia >> 13 2.1.3.2. Trapianto di rene >> 14 2.1.3.3. Conservazione di organi >> 15 2.2. Il danno da ischemia e riperfusione >> 17 2.2.1. Danni intracellulari: la fase ischemica >> 18 2.2.2. La risposta infiammatoria: la fase di riperfusione >> 20 2.2.2.1. Le cellule endoteliali >> 21 2.2.2.2. Le cellule epiteliali tubulari >> 22 2.2.2.3. Le cellule infiammatorie >> 23 2.2.3. La morte cellulare >> 25 2.2.3.1. La necrosi >> 26 2.2.3.2. L’apoptosi >> 26 2.2.3.3. L’autofagia >> 28 2.2.4. La riparazione tissutale >> 28 2.2.4.1. Riparazione favorevole >> 28 2.2.4.2. Riparazione sfavorevole: fibrosi e rigetto cronico >> 29 2.3. Survivin >> 32 2.3.1. Struttura e isoforme >> 32 2.3.2. Funzione >> 34 2.3.2.1. Inibizione dell’apoptosi >> 34 2.3.2.2. Promozione della divisione cellulare >> 35 2.3.3. Regolazione e localizzazione cellulare >> 35 2.3.4. Espressione di survivin nei tessuti >> 37 2.3.4.1. Survivin nello sviluppo embrionale >> 37 2.3.4.2. Survivin nei tessuti adulti >> 37 2.3.5. Survivin nel danno da ischemia/riperfusione >> 40 2.3.5.1. L’ischemia/riperfusione nel trapianto di rene: studi precedenti >> 41 3. SCOPO DELLA TESI Pag 44 4. MODELLO SPERIMENTALE Pag 45 4.1. Modello 1: Over-espressione di survivin in un trapianto renale singenico >> 45 INDICE Pag 2 4.2. Modello 2: Over-espressione di survivin in un trapianto renale allogenico >> 48 5. MATERIALI E METODI Pag 51 5.1. Animali >> 51 5.2. Trapianto di rene >> 51 5.3. Over-espressione di survivin >> 52 5.4. Misurazione della BUN >> 52 5.5. Ottenimento delle sezioni renali >> 53 5.6. Analisi istologiche >> 54 5.6.1. Colorazione con ematossilina-eosina (H&E) >> 54 5.6.2. Colorazione con acido periodico-reattivo di Schiff (PAS) >> 55 5.6.3. Valutazione del danno morfologico >> 55 5.7. Analisi immunoistochimiche >> 57 5.8. Analisi di immunofluorescenza >> 60 5.8.1. Immunofluorescenza singola >> 60 5.8.2. Immunofluorescenza doppia >> 63 5.9. Analisi dell’apoptosi: la tecnica TUNEL POD >> 64 5.10. Estrazione degli splenociti dalla milza >> 66 5.11. Esperimenti in vitro di MLR-IFN-γ-ELISPOT >> 67 5.12. Analisi statistiche >> 69 6. RISULTATI Pag 70 6.1. Modello sperimentale 1. L’over-espressione di survivin nel rene del donatore protegge il tessuto dai danni da I/R in un trapianto singenico >> 70 6.1.1. Hydrodinamic injection di srv-pcDNA aumenta l’espressione di survivin nel rene >> 70 6.1.2. L’over-espressione di survivin preserva la funzione renale e limita il danno tissutale dovuto ad I/R nel trapianto di rene singenico >> 72 6.1.3. L’over-espressione di survivin previene l’infiltrazione di neutrofili e macrofagi e lo stress ossidativo nel trapianto di rene singenico >> 74 6.1.4. L’over-espressione di survivin protegge dall’apoptosi e promuove la proliferazione cellulare nel trapianto di rene singenico >> 75 6.2. Modello sperimentale 2. L’over-espressione di survivin nel rene del donatore protegge il tessuto in un trapianto allogenico >> 78 6.2.1. L’over-espressione di survivin preserva la funzione renale e limita il danno tissutale dovuto ad I/R nel trapianto di rene allogenico >> 78 6.2.2. L’over-espressione di survivin protegge dall’apoptosi dopo il trapianto allogenico >> 80 6.2.3. L’over-espressione di survivin limita il numero di neutrofili e macrofagi infiltranti il rene un giorno dopo il trapianto allogenico >> 80 6.2.4. L’over-espressione di survivin promuove la presenza di macrofagi M2 e la riparazione tissutale dopo il trapianto allogenico >> 82 6.2.5. L’over-espressione di survivin limita l’attivazione della risposta immunitaria dei linfociti T nel trapianto di rene allogenico >> 84 6.2.6. L’over-espressione di survivin previene lo sviluppo del rigetto cronico >> 88 INDICE Pag 3 7. DISCUSSIONE Pag 92 8. BIBLIOGRAFIA Pag 98 RINGRAZIAMENTI Pag 110
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Survivin protegge il rene trapiantato dai danni da ischemia/riperfusione (I/R)

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Informazioni tesi

  Autore: Fabiana Rapezzi
  Tipo: Laurea liv.II (specialistica)
  Anno: 2012-13
  Università: Università degli Studi di Milano - Bicocca
  Facoltà: Scienze Matematiche, Fisiche e Naturali
  Corso: Biotecnologie industriali
  Relatore: Maria Foti
  Lingua: Italiano
  Num. pagine: 111

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Parole chiave

infiammazione
apoptosi
rene
ischemia
trapianto
proliferazione cellulare
riperfusione
survivin
trapianto renale

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