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Analisi proteomica del tessuto renale di gatti abissini affetti da amiloidosi

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Anteprima della tesi: Analisi proteomica del tessuto renale di gatti abissini affetti da amiloidosi, Pagina 2
2 
 
Riassunto 
 
Questa tesi ha come scopo quello di caratterizzare dal punto di vista proteico i depositi 
amiloidi presenti nel tessuto renale di gatti abissini in modo tale da poter determinare 
quale proteina è presente maggiormente in questi depositi e caratterizzare il tipo di 
amiloidosi. Tramite un approccio definito “Shotgun proteomics” si è analizzato il 
proteoma di tre gatti abissini affetti da questa patologia e lo si è confrontato con quello 
di altri tre animali sani, utilizzati come controllo. Partendo da campioni FFPE, si è 
ottenuto un estratto proteico il cui contenuto è stato dosato tramite saggio di Bradford. 
Successivamente le macromolecole ottenute sono state preparate per l’analisi allo 
spettrometro di massa. In particolare le proteine hanno subito un processo di 
denaturazione, riduzione, alchilazione delle cisteine e digestione triptica. Dopo aver 
desalinizzato e concentrato i peptidi tramite uso di ZipTip C18, si è passati all’analisi 
spettrometrica vera e propria (LC-MS/MS) condotta grazie all’uso dello strumento 
LTQ-Orbitrap Velos. I dati ottenuti sono stati elaborati mediante i software MaxQuant 
e Perseus. L’ultima fase dello studio prevedeva un’analisi funzionale mediante i 
software DAVID e Panther che permettono di classificare le proteine differenzialmente 
espresse nelle due classi di campioni, sani e malati, in base alle loro funzioni 
molecolari e ai processi biologici in cui sono coinvolte in modo da valutare quali 
pathways biochimici e quali attività cellulari vengono alterate dal processo di 
amiloidosi.  
Nei campioni renali affetti da amiloidosi sono state individuate 215 proteine 
esclusivamente o maggiormente espresse. Mentre nella seconda classe di campioni, 
usata come controllo, si è notata un’espressione esclusiva o significativamente 
maggiore di altre 56 proteine. Questa diversa espressione proteica tra tessuto sano e 
malato potrebbe essere interpretata come tentativo da parte delle cellule renali di 
controbilanciare gli effetti multipli della malattia. Nonostante ciò, non è ancora noto il 
meccanismo molecolare alla base dello sviluppo dell’amiloidosi.  
Tale ricerca è stata condotta nell’ambito di uno studio più ampio in cui i dati di 
proteomica qui presentati sono stati integrati con i dati di genomica e miRNAomica in 
modo da avere un quadro più chiaro dello sviluppo e delle conseguenze determinate 
dalla patologia.

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Analisi proteomica del tessuto renale di gatti abissini affetti da amiloidosi

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Informazioni tesi

  Autore: Luca Diamante
  Tipo: Laurea liv.I
  Anno: 2018-19
  Università: Università degli Studi di Milano
  Facoltà: Scienze Biotecnologiche
  Corso: Biotecnologie veterinarie
  Relatore: Gabriella Tedeschi
  Lingua: Italiano
  Num. pagine: 33

FAQ

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Parole chiave

spettrometria di massa
bioinformatica
analisi funzionale
proteomica
amiloidosi
espressione proteica
materiali e metodi
proteomics shotgun
gatti abissini

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