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Il Dna barcoding per l'identificazione delle piante aromatiche commerciali

Estratto della Tesi di Alessio Fumagalli

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15 3.2 ANALISI QUALITATIVA E QUANTITATIVA DEL DNA ESTRATTO Per verificare la qualità del DNA estratto si procede all’analisi mediante elettroforesi su gel di agarosio all’1%. Il gel viene preparato aggiungendo 1 g di agarosio a 100ml di TAE. L’agarosio è solubile in acqua ad alte temperature e raffreddandosi diventa solido formando una matrice attraverso legami tra catene lineari. Il DNA viene visualizzato mediante l’aggiunta di etidio bromuro. L’elettroforesi viene condotta in tampone TAE a 100V e per circa 30 minuti. Il DNA, una molecola carica negativamente migrerà verso il polo positivo con una velocità inversamente proporzionale alla sua dimensione. Al termine dell’elettroforesi, il gel viene osservato al transilluminatore, un apparecchio di emettere raggi UV che rendono visibile il complesso DNA-etidio di bromuro per fluorescenza; una banda netta nella parte superiore del gel è indice di DNA genomico integro e la sua quantità è funzione dell’intensità luminosa della suddetta banda. Mediate il confronto con un marcatore a concentrazione nota è possibile determinare il quantitativo di DNA gnomico estratto per i differenti campioni. 3.3 Reazione a catena della polimerasi La reazione a catena della polimerasi è un metodo di biologia molecolare che consente la moltiplicazione di frammenti di DNA dei quali si conoscano le sequenze nucleotidiche iniziali e terminali. Tale metodica fu inventata nel 1983 da Kary B.Mullis. il principio su cui si basa questo processo è lo stesso della naturale duplicazione del DNA, ma in questo caso si tratta di una serie di reazioni controllate e ripetute. Oltre al frammento di DNA che si intende moltiplicare la soluzione di reazione deve contenere: gli dNTPs (deossinucleotidi liberi), una coppia di primers (inneschi) ossia brevi frammenti di DNA a singola elica complementari alle sequenze 5’ e 3’ del segmento da amplificare, diversi cofattori come gli ioni magnesio e, infine, la Taq polimerasi, un enzima estratto da microrganismi termofili (Thermus aquaticus) che non viene perciò irreversibilmente denaturato dalle alte temperature. In ogni ciclo di PCR si susseguono una fase di denaturazione, una fase di annealing e una di polimerizzazione. Inizialmente il DNA deve essere denaturato, ovvero i filamenti devono essere separati, ad una temperatura superiore ai 90°C. La seconda fase consiste nel legare i primer alle regioni di DNA denaturate e complementari a temperature che differiscono in funzione del
Estratto dalla tesi: Il Dna barcoding per l'identificazione delle piante aromatiche commerciali

Estratto dalla tesi:

Il Dna barcoding per l'identificazione delle piante aromatiche commerciali

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Informazioni tesi

  Autore: Alessio Fumagalli
  Tipo: Laurea liv.I
  Anno: 2008-09
  Università: Università degli Studi di Milano - Bicocca
  Facoltà: Scienze Matematiche, Fisiche e Naturali
  Corso: Scienze biologiche
  Relatore: Massimo Labra
  Lingua: Italiano
  Num. pagine: 29

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Parole chiave

spezie
tracciabilità agroalimentare
piante aromatiche
dna barcoding
estrazione dna
sequenze
lamiaceae
sequenziamento dna

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